反相色譜柱的清洗和再生是維護(hù)色譜柱性能、延長使用壽命的重要步驟。以下是具體的清洗和再生方法：

一、清洗方法

1. 日常清洗：

   • 每次色譜柱使用完畢后，都應(yīng)進(jìn)行日常常規(guī)清洗。
   • 首先使用10%甲醇水清洗1個小時，以去除大極性雜質(zhì)。
   • 然后使用純甲醇清洗1個小時，以去除非極性雜質(zhì)。

2. 針對特定污染物的清洗：

   • 如果色譜柱被蛋白質(zhì)等生物物質(zhì)污染，可以使用高比例的強極性溶劑（如乙腈∶異丙醇=1:2，V/V）進(jìn)行沖洗，或者使用0.1%的三氟乙酸水溶液、0.1%乙酸水溶液、1%十二烷基硫酸鈉（SDS）等溶液進(jìn)行清洗。
   • 清洗過程中，可以逐步過渡到強洗脫溶劑，例如逐漸增加乙腈的含量，以確保去除強吸附物質(zhì)。
   • 如果使用了梯度洗脫，可以逐步反向梯度，減少高強洗脫成分的比例，確保全程清洗干凈。

3. 特殊技巧：

   • 對于硅膠基質(zhì)鍵合反相柱，在未使用緩沖溶液的條件下，可以使用一系列溶劑進(jìn)行清洗，如100%甲醇、100%乙腈、75%乙腈/25%異丙醇、100%異丙醇、100%二氯甲烷、100%正己烷等。每種溶劑沖洗至少10個柱體積，以確保清洗效果。
   • 如果懷疑柱子被嚴(yán)重污染，可以使用二甲亞砜（DMSO）或二甲基甲酰銨和水按50:50的比例混合，以低于0.5ml/min的流速沖洗色譜柱。

二、再生方法

1. 反沖再生：

   • 當(dāng)色譜柱出現(xiàn)柱效下降、峰分叉、拖尾、分離度不好等情況時，可以考慮進(jìn)行反沖再生。
   • 將色譜柱反接，不接檢測器，先用流動相A（如900ml水+100ml乙腈+3ml磷酸）以正常使用流速的一半沖洗300分鐘。
   • 再用流動相B（如900ml乙腈+100ml水+3ml磷酸）以正常使用流速的一半沖洗300分鐘。
   • 最后用異丙醇以正常使用流速的一半沖洗2個小時。整個過程可以晚上進(jìn)行，以節(jié)省時間。

2. 注意事項：

   • 在進(jìn)行清洗和再生之前，應(yīng)確保所有樣品已通過色譜系統(tǒng)，并盡量用流動相沖洗殘留樣品。
   • 在切換溶劑時，應(yīng)避免突然轉(zhuǎn)換到高濃度有機(jī)溶劑，以防止緩沖鹽沉淀導(dǎo)致的問題。
   • 在使用特定清洗溶劑之前，最好先咨詢柱子的廠商，以確保這些溶劑不會對填料帶來損壞。
   • 清洗和再生過程中，應(yīng)密切注意色譜柱的壓力變化，以避免因壓力過大而導(dǎo)致的損壞。

綜上所述，反相色譜柱的清洗和再生需要根據(jù)具體情況選擇合適的方法和溶劑。通過合理的清洗和再生步驟，可以有效地恢復(fù)色譜柱的性能并延長其使用壽命。